Реферат: Диагностика стафилококковых инфекций

Med-books.by - Библиотека медицинской литературы. Книги, справочники, лекции, аудиокниги по медицине. Банк рефератов. Медицинские рефераты. Всё для студента-медика.
Скачать бесплатно без регистрации или купить электронные и печатные бумажные медицинские книги (DJVU, PDF, DOC, CHM, FB2, TXT), истории болезней, рефераты, монографии, лекции, презентации по медицине.


=> Книги / Медицинская литература: Акупунктура | Акушерство | Аллергология и иммунология | Анатомия человека | Английский язык | Анестезиология и реаниматология | Антропология | БиоХимия | Валеология | Ветеринария | Внутренние болезни (Терапия) | Военная медицина | Гастроэнтерология | Гематология | Генетика | География | Геронтология и гериатрия | Гигиена | Гинекология | Гистология, Цитология, Эмбриология | Гомеопатия | ДерматоВенерология | Диагностика / Методы исследования | Диетология | Инфекционные болезни | История медицины | Йога | Кардиология | Книги о здоровье | Косметология | Латинский язык | Логопедия | Массаж | Математика | Медицина Экстремальных Ситуаций | Медицинская биология | Медицинская информатика | Медицинская статистика | Медицинская этика | Медицинские приборы и аппараты | Медицинское материаловедение | Микробиология | Наркология | Неврология и нейрохирургия | Нефрология | Нормальная физиология | Общий уход | О достижении успеха в жизни | ОЗЗ | Онкология | Оториноларингология | Офтальмология | Паллиативная медицина | Паразитология | Патологическая анатомия | Патологическая физиология | Педиатрия | Поликлиническая терапия | Пропедевтика внутренних болезней | Профессиональные болезни | Психиатрия-Психология | Пульмонология | Ревматология | Сестринское дело | Социальная медицина | Спортивная медицина | Стоматология | Судебная медицина | Тибетская медицина | Топографическая анатомия и оперативная хирургия | Травматология и ортопедия | Ультразвуковая диагностика (УЗИ) | Урология | Фармакология | Физика | Физиотерапия | Физическая культура | Философия | Фтизиатрия | Химия | Хирургия | Экологическая медицина | Экономическая теория | Эндокринология | Эпидемиология | Ядерная медицина

=> Истории болезней: Акушерство | Аллергология и иммунология | Ангиология | Внутренние болезни (Терапия) | Гастроэнтерология | Гематология | Гинекология | ДерматоВенерология | Инфекционные болезни | Кардиология | Наркология | Неврология | Нефрология | Онкология | Оториноларингология | Офтальмология | Педиатрия | Профессиональные болезни | Психиатрия | Пульмонология | Ревматология | Стоматология | Судебная медицина | Травматология и ортопедия | Урология | Фтизиатрия | Хирургия | Эндокринология

=> Рефераты / Лекции: Акушерство | Аллергология и иммунология | Анатомия человека | Анестезиология и реаниматология | Биология | Биохимия | Валеология | Ветеринария | Внутренние болезни (Терапия) | Гастроэнтерология | Генетика | Гигиена | Гинекология | Гистология, Цитология, Эмбриология | Диагностика | ДерматоВенерология | Инфекционные болезни | История медицины | Лечебная физкультура / Физическая культура | Кардиология | Массаж | Медицинская реабилитация | Микробиология | Наркология | Неврология | Нефрология | Нормальная физиология | Общий уход / Сестринское дело | Озз | Онкология | Оториноларингология | Офтальмология | Патологическая анатомия | Педиатрия | ПатоФизиология | Профессиональные болезни | Психиатрия-Психология | Пульмонология | Ревматология | Скорая и неотложная медицинская помощь | Стоматология | Судебная медицина | Токсикология | Травматология и ортопедия | Урология | Фармакогнозия | Фармакология | Фармация | Физиотерапия | Фтизиатрия | Химия | Хирургия | Эндокринология | Эпидемиология | Этика и деонтология

=> Другие разделы: Авторы | Видео | Клинические протоколы / Нормативная документация РБ | Красота и здоровье | Медицинские журналы | Медицинские статьи | Наука и техника | Новости сайта | Практические навыки | Презентации | Шпаргалки


Med-books.by - Библиотека медицинской литературы » Рефераты: Инфекционные болезни » Реферат: Диагностика стафилококковых инфекций

Реферат: Диагностика стафилококковых инфекций

0

Скачать бесплатно реферат:
«Диагностика стафилококковых инфекций»



Предисловие
Несмотря на то, что стафилококки принадлежат к числу наиболее легко обнаруживаемых и распозна¬ваемых микроорганизмов, не требующих сложных диагностических приемов для их выявления, в прак¬тической работе микробиологи до сих пор испыты¬вают определенные трудности при установлении их причинной роли в ряде различных заболеваний. С од¬ной стороны, присутствие патогенных стафилококков, обнаруживаемое в исследуемом материале, не всегда является убедительным доказательством их этиоло¬гического значения. С другой, учитывая большое разнообразие проявлений биологической активности этих микробов, зависящее от разных, не всегда под¬дающихся учету факторов, широкую их изменчивость под влиянием лекарственных веществ и самого мак¬роорганизма, довольно сложно бывает определить их потенциальную патогенность. Наконец, третья причи¬на связана с тем, что стафилококки являются пред¬ставителями нормальной микрофлоры из группы условно патогенных микроорганизмов и, наряду с не¬патогенными, патогенные представители обитают в организме людей, распространяясь при этом весьма неравномерно на разные участки человеческого тела.
Если выделение патогенного стафилококка, из кро¬ви больных людей и различных полостей, которые принято считать стерильными, в подавляющем боль¬шинстве случаев может служить доказательством его роли как возбудителя болезни, то присутствие ста¬филококков на слизистых зева, носа и т. д. даже при явном болезненном состоянии их требует большой осторожности исследователя в выводах об этиологии данных заболеваний.
Поэтому, естественно, не может быть общих ре¬комендаций, как при диагностике различных стафи¬лококковых инфекций, так и при микробиологических исследованиях участков тела человека и разных объ¬ектов внешней среды. Широкий обмен мнениями между микробиолога¬ми научных учреждений и практических лаборато¬рий, осуществляемый на съездах и конференциях, посвященных проблемам стафилококковых инфекций, а также при личных контактах, казалось бы, должен был привести к определенным взглядам на различ¬ные методы исследования, предлагаемые для выде¬ления и идентификации стафилококков. Однако боль¬шое число запросов, поступающих из лабораторий СЭС и лечебных учреждений, свидетельствует о яв¬ных затруднениях, которые возникают у исследова¬телей при решении разных вопросов микробиологи¬ческой диагностики стафилококков, а в ряде микро-биологических учреждений бытуют еще некоторые устаревшие методы и приемы, приводящие к непра¬вильным оценкам и даже досадным недоразумениям.
Важным условием эффективности лабораторной диагностики является сочетанное определение каче¬ственных и количественных критериев содержания патогенных стафилококков в исследуемом материале. Исходя из этого, я считаю необходимым изложить ряд методов основных микробиологических исследо-ваний, наиболее простых и доступных для каждой практической и научной лаборатории, которыми мы пользуемся в течение многих лет.

ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ОБНАРУЖЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ СТАФИЛОКОККОВ
Предварительная диагностика стафилококков мо¬жет основываться на бактериоскопическом изучении препаратов — мазков, окрашенных по Граму. Пато¬генные стафилококки, помимо гроздевидного распо¬ложения, характеризуются правильной сферической формой клеток. Обнаружение стафилококков, нахо¬дящихся внутри клеток, позволяет дать ответ о на¬личии стафилококковой инфекции. В большинстве же случаев для точного установления патогенности об¬наруженных стафилококков требуется выделить эти микроорганизмы в чистой культуре путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды.
В настоящее время ассортимент дифференциаль¬ных, элективных и накопительных сред, предложен¬ных для выделения патогенных стафилококков, весь¬ма значителен и продолжает расширяться. Многие исследователи на основе знания основных биохими¬ческих характеристик и питательных потребностей патогенных стафилококков при конструировании сред стремятся повысить их высеваемость и обеспечить возможность осуществлять их количественный учет, получить надежный способ отличать потенциально болезнетворные стафилококки от сапрофитов.
Употребление жидких накопительных сред для первичного выделения стафилококков нецелесообраз¬но, так как лишает исследователя возможности количественной оценки содержания микробов в об¬следуемых объектах, а при случайных загрязнениях способствует ошибкам. Особенно это относится к та¬ким исследованиям, как обнаружение носительства патогенных стафилококков, где доказательством яв¬ляется лишь массивный рост, либо определение этио-логической роли этих микроорганизмов "при пищевых отравлениях или наружных воспалительных процес¬сах. Если же речь идет об исследовании крови, а так¬же о тех немногих случаях, когда бывает необходимо выявить даже единичные жизнеспособные особи этих микробов, например при контроле эффективности дезинфекции, проверке на стерильность или титрационных посевах, то в подобных случаях ис¬пользование накопительных сред вполне оправ¬дано.
Из большого числа разнообразных питательных сред, опробованных для первичного выделения ста¬филококков, в практике оправдал,;1' себя немногие. Обычный питательный агар (рН 7,2 7,4), приготов¬ленный путем добавления 2% агар-агара к мясопептонному бульону или к триптическому перевару Хоттингера, может быть использован при исследова¬нии экссудатов из закрытых полостей. Стафилококки вырастают через 18—24 ч инкубации при 37° С в виде гладких блестящих с ровными краями непрозрачных и слегка выпуклых колоний. Характер пигмента вы¬является лучше после дополнительного суточного выдерживания чашек при комнатной температуре (20° С) на свету. Если в исследуемом материале при¬сутствует посторонняя флора, то по внешнему виду колонии стафилококков могут быть трудно отличимы.
Употребление кровяного агара дает возможность, кроме выявления пигмента, определить и гемолитическую активность стафилококков. При этом необхо¬димо помнить, что гемолитическая способность, определяемая на чашках с кровяным агаром, зависит от многих факторов — вида крови, ее концентрации, наличия в ней антитоксинов, толщины слоя среды, содержания углекислого газа в атмосфере культиви¬рования, густоты посева, присутствия и характера со-путствующей флоры и т. д.
При отборе колоний с кровяного агара необходи¬мо отвивать как гемолитические, так и не дающие гемолиза, особенно если исследование проводится на среде с человеческой или лошадиной кровью, а от¬сутствие гемолиза на таких средах не позволяет за¬ключить об отсутствии вообще гемолитической актив¬ности. Поэтому использование кровяного агара для первичного посева целесообразно только при обсле¬довании объектов, не содержащих посторонней мик¬рофлоры, и желательно добавлять в питательную среду кровь кролика или барана.
Если же проводится исследование гноя открытых ран или отделяемого язв или свищей, то следует пользоваться элективно-дифференциальной средой для стафилококков — желточно-солевым агаром (ЖСА) Г. Н. Чистовича. Элективность этой среды обеспечивается высоким содержанием хлористого натрия, а добавленный яичный желток позволяет вы¬являть лецитовителлазную активность, которая является одним из показателей патогенности стафило¬кокков и в силу этого ЖСА более четко дифференци¬рует патогенных представителей, чем кровяной агар. Приготовление ЖСА несложно.
Заготовляют впрок и стерилизуют в автоклаве при 120 °С" в течение 20 мин питательный агар (МПА или Хоттингера) рН 7,2—7,4, содержащий 10% поваренной соли. Перед употреблением солевой питательный агар растапливают, остужают до 45—50 °С и добавляют к нему 20% по объему стерильной желточной взве¬си (1 желток куриного яйца на 200 мл физиологического рас-твора). Для лучшего эмульсирования желательно иметь колбы со стеклянными бусами. После тщательного перемешивания среду разливают по 20—25 мл в чашки, которые могут храниться в хо¬лодильнике в течение нескольких дней.
Следует производить массивный посев исследуе¬мого материала на чашки с ЖСА, а инкубацию вести в течение 2 суток при 35—37° С. Посторонняя флора резко подавляется, стафилококки же на ЖСА выра¬стают практически в чистой культуре. Непосредст¬венно при просмотре чашек вокруг колоний отме¬чается образование радужных венчиков и мутной зоны — лецитовителлазная реакция. Такие колонии, не менее двух из каждого посева, отвивают на скошенный мясо-пептонный агар для последую¬щей проверки выросших культур в реакции плазмо-коагуляции.
Чтобы избежать ошибок в определении желточ¬ной реакции, необходимо иметь в виду, что иногда наблюдается помутнение среды без радужного обод¬ка, в этом случае проба на лецитовителлазу считает¬ся отрицательной. Если же колонии, выросшие на ЖСА, не дают лецитовителлазной реакции, т. е. не окружены радужным венчиком, но имеется рост ста¬филококков, то их тоже считают подозрительными и также отвивают не менее двух из каждого такого посева на чашки с простым питательным агаром пятнами диаметром 5—10 мм. После суточного инкубирования при 37° С полученные макроколонии про-веряют в реакции плазмоагглютинации, для чего микробную массу размешивают петлей на стекле в каплях цитратной кроличьей или человеческой плаз¬мы, разведенной 1 :4. Образование хлопьев учиты¬вают в течение 30с—1 мин. При наличии плазмоаг¬глютинации такие штаммы считают подозрительными и отвивают на скошенный агар для дальнейшего изу¬чения в коагулазной реакции. При таком отборе число пропускаемых штаммов патогенных стафило¬кокков человеческого происхождения невелико, куль¬туры же, выделенные от животных, требуется прове¬рять в реакции плазмокоагуляции.
Коагулазная проба является основным признаком, определяющим болезнетворность стафилококков, по¬этому ее постановка требует к себе максимального внимания. Для выявления коагулазной активности у стафилококков, выделенных от людей, можно поль¬зоваться как цельной кровью, так и плазмой кроли¬ков или человека. Можно использовать также кровь или плазму, взятую непосредственно от человека. Консервированная плазма или кровь, используемые для переливания, непригодны для реакции, так как к ним часто добавляются консерванты, которые пре¬пятствуют жизнедеятельности стафилококков, прояв¬лению коагулазной активности. Не следует приме¬нять кровь животных или людей, переносящих стафи¬лококковые заболевания, в особенности затяжные, так как она может оказаться нестерильной и содержать антикоагулазу. При работе со стафилококками, выде¬ленными от рогатого скота, можно пользоваться бы¬чьей кровью.
Асептично взятую кровь стабилизируют с помощью 1—4% цитрата или 0,1% оксалата. Для получения плазмы нитратную кровь центрифугируют или отстаивают на холоду. Но, как уже говорилось, можно пользоваться и цельной кровью. Затем кровь разводят стерильным физиологическим раствором в соотношении 1 : 3 или 1 : 5 и разливают по 0,2—0,3 мл в стерильные пробирки, которые перед стерилизацией должны быть тщательно вымыты, так как остатки химических веществ могут влиять на результат плазмокоагуляции.
Испытуемые агаровые культуры стафилококков вносят пет¬лей в плазму и хорошо перемешивают. Бульонные культуры вно¬сят пипеткой в объеме 0,1 мл В каждом опыте необходимо ста¬вить контроль с культурами заведомо патогенных стафилококков, дающих коагулазную реакцию, и штаммами коагулазоотрицатель-ных микроорганизмов. Кроме того, часть пробирок с разлитой плазмой следует оставлять не засеянной микробами и выдержи¬вать в термостате на протяжении всего срока опыта. В случае наступления коагуляции хотя бы в одной из них весь опыт нужно переставить с новой порцией крови. Пробирки с исследуемыми культурами выдерживают в термостате при 37 °С в течение су¬ток. Учет результатов проводится обязательно дважды: через 2—3 ч и 24 ч. Учитывают свертывание плазмы и образование сгустков. Обычно культуры, активно продуцирующие коагулазу, дают положительную реакцию уже через 2—3 ч. а если они обла¬дают и выраженной фибринолитической активностью, то перво¬начально образовавшиеся сгустки могут подвергнуться расплавлению к концу суток. Слабокоагулирующие штаммы могут давать положительную реакцию в поздние сроки—к концу суток. Опыты, давшие сомнительный результат, необходимо повторить.
Некоторые исследователи, получив отрицательный или сомни¬тельный результат, оставляют пробирки на столе. Этого делать нельзя, так как свертывание плазмы в более поздние сроки мо¬жет носить не специфический характер и его не следует прини¬мать во внимание.
Стафилококки, дающие положительную коагу¬лазную пробу, должны рассматриваться как потен¬циально патогенные, независимо от наличия или от-сутствия у них гемолитических свойств и характера пигмента, их относят к виду St. aureus и в дальней¬шем подвергают фаготипизации и проверке на чув-ствительность к антибио¬тикам.
Углубленное изучение стафилококков показало, что основной признак па-тогенности — коагулазная реакция может под¬вергаться изменчивости при воздействии различ¬ных факторов (Г. Н. Чистович, 1961; Е. М. Паде¬рина, 1966), поэтому в ряде случаев, при выде¬лении коагулазонегативных стафилококков в мо¬нокультуре из патологи¬ческих очагов, целесооб¬разно изучить у них дру¬гие признаки потенциаль¬ной болезнетворности и прежде всего — способ¬ность ферментировать маннит в анаэробных условиях. Известно, что среди коагулазоотрицательных часть культур обладает способностью расщеплять маннит в анаэробных условиях (8,4% —по данным А. А. Ака¬това и М. Л. Хатеневер, 1974).
Определение ферментации маннита в анаэробных условиях технически очень просто и осуществляется путем посева уколом исследуемых культур в пробирки с высоким столбиком полу¬жидкого агара Хоттннгера, содержащего 1% маннита и 0,004% индикатора бромкрезолпурпура или бромтимолблау (рН == 7,2). Эту среду перед посевом «регенерируют», т. е. кипятят в водяной бане, быстро охлаждают, а после посева заливают слоем сте¬рильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 5 дней. Однако в значительном числе случаев результаты могут быть учтены уже через сутки.
Наряду с реакцией плазмокоагуляции, большое значение приобрела еще одна важная способность стафилококков, характеризующая их потенциальную патогенность, —дезоксирибонуклеазная активность. Многие исследователи сообщают о высокой корреля¬ции этого признака с коагулазной активностью и токсигенностью изучаемых культур; отмечают, что стафилококки, выделенные из патологического мате¬риала, как правило, обладают ДНК-азой. Коагула-зопозитивные штаммы, полученные от носителей, могут не иметь этого фермента, и обычно отсутствие дезоксирибонуклеазной активности сочетается с низ¬кой биохимической способностью и атоксигенностью таких культур стафилококков.
По наблюдениям некоторых исследователей, сре¬ди коагулазонегативных штаммов стафилококков, но обладавших другими признаками патогенности, вы-деленных в ряде случаев от больных с различными гнойными инфекциями, дезоксирибонуклеазную ак¬тивность проявляли от 10 до 29% таких культур (И. И. Панышева и сотр., 1967; Franklin и соавт., 1966; Lierd и Golde, 1970).
В настоящее время этот тест может служить на¬дежным дифференциальным признаком между пато¬генными и непатогенными стафилококками и в то же время может помочь в дифференциации степени патогенности коагулазопозитивных штаммов и, без¬условно, привлечет внимание к коагулазонегативным, но обладающим этим ферментом культурам ста¬филококков и в ряде случаев позволит отнести по¬следние к болезнетворным формам с большей уве¬ренностью.
Методика определения дезоксирибонуклеазной активности не¬сложна, в основу ее положен метод Джеффриса. Готовят впрок 2% МПА (рН—8,6), содержащий ДНК (2 мг/мл среды), разли¬вают по флаконам и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Перед разливом в чашки к среде добавляют CaCIa (0,8 мг/мл). На подсушенную среду засевают суточные культуры стафилокок¬ков. После инкубации в течение 18—20 ч при 37°, на поверхность среды наливают IN раствор НС1 и через 7—10 мин учитывают зоны просветления, которые оценивают крестами (Н. Б. Морд¬винова и соавт., 1967).
Нами предложен более экономичный метод для обнаружения ДНК-азы у микроорганизмов. Этот спо¬соб, помимо уменьшения в 2 раза расхода ДНК на каждый опыт, позволяет использовать более деше¬вую низкополимерную нуклеиновую кислоту, изго¬товляемую Олайнским заводом химических реакти-вов. Предлагаемая методика широко апробирована на кафедре микробиологии ЛСГМИ и по качеству результатов не уступает общепринятой. Поэтому мы приводим ее подробное описание.
Для приготовления рабочего раствора ДНК, навеску нуклеи¬новой кислоты из расчета 10 мг/мл помещают в дистиллирован¬ную воду, добавляют 0,5 мл 0,2% (или 0,8%) раствора NaOH на каждые 10 мл воды. Для лучшего растворения ДНК смесь либо нагревают до кипения в водяной бане при постоянном перемеши¬вании стеклянной палочкой, либо оставляют на ночь при 37 °С в термостате. К расплавленному и остуженному до 50 °С МПА добавляют рабочий раствор ДНК из расчета 1 мг/мл (на 9 мл МПА—1 мл раствора ДНК), перемешивают, разливают по10л(л в пробирки, стерилизуют текучим паром в течение 30 мин или в автоклаве при 0,5 атмосферы в течение 20 мин. Срок хранения— 1—2 мес.
При постановке опыта столбики агара с ДНК растапливают, в водяной бане добавляют 0,1 мл официнального стерильного 10% р-ра СаСЬ, перемешивают и выливают на слой хорошо под¬сушенного питательного агара в чашки Петри и вновь подсуши¬вают. Суточную агаровую культуру засевают маленькими бляш-ками (диаметр равен 2—2,5 мм) или штампом-репликатором не более 20—25 бляшек, во избежание слияния зон деполимериза¬ции ДНК. После 18—20-часовой инкубации поверхность агара за¬ливают 5 мл IN раствора НС1 и через 3—5 мин учитывают зоны просветления. Реакции оценивают в крестах.
При этом следует учесть, что интенсивность зоны деполиме¬ризации на плотной среде не всегда совпадает с количеством про¬дукции этого фермента у исследуемых стафилококков в жидких средах.
Для обнаружения фибринолизина исполь¬зуют несколько усовершенствованный метод Кристи с сотр.
Среда Кристи—Чепмена имеет следующий состав: мясной экстракт—0,45 г, пептон—0,75 г, хлористый натрий—1,2 г, агар—2,75 г, вода—130 мл, рН среды == 7,0. Стерилизуется в автоклаве и сохраняется впрок.
Перед опытом среду растапливают, остужают до 50 °С и до¬бавляют 15—20% стерильной цитратной человеческой плазмы. Смесь прогревается в водяной бане при 65—70°С в течение 2— 5 мин до появления ясной мути, а затем разливается в чашки. Испытуемые культуры засевают «пятнами» по 15—20 на чашку. Посевы инкубируют при 37 °С. Учитывается образование зон про¬светления вокруг колонии первоначально через 14 ч, затем через 24 и 48 ч, так как реакция у различных культур течет неодина¬ково быстро и у ряда штаммов она развивается в более поздние сроки.
Фибринолитический тест мы считаем весьма при¬годным для определения потенциальной болезнетворности стафилококков, но оцениваем только в комп-лексе с другими признаками активности.
Гиалуронидазная активность опреде¬ляется по методу Мак-Клина в модификации М. Ш. Могилевского и Л. С. Коган (1949).
Раствор гиалуроната дающий в присутствии 2 N уксусной кислоты типичный сгусток, разливается по 0,5 мл в стерильные пробирки. Добавляется 0,5 мл суточной культуры стафилококка в пептонной воде. Контролями служат: гиалуропат + дистилли¬рованная вода и гиалуропат + незасеянная среда. Смеси встря¬хиваются и выдерживаются при 37 °С 15—20 мин. Затем в каж¬дую пробирку добавляется по две капли 2 N раствора уксусной кислоты и встряхивается. В контролях должен образоваться сли¬зистый комочек. В опыте при наличии гиалуронидазы он отсут¬ствует, что свидетельствует о деполимеризации гиалуроновой кис¬лоты микробным ферментом.
Для изучения токсигенности стафи¬лококков удобно пользоваться методом, предло¬женным Илеком и Леви (1950), позволяющим опре¬делить типы гемолизинов.
С этой целью готовятся чашки с питательным агаром, содер¬жащим 5% отмытых физиологическим раствором эритроцитов барана, кролика и человека.
На поверхность питательной среды по диаметру помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, смоченную альфа-антитоксической сывороткой. Отступив 1—2 мл от края полоски, перпендикулярно к ней засеивают штрихами исследуемые куль¬туры. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток, после чего учитывают результаты.
Альфа-гемолиз проявляется в виде полного просветления среды вокруг штриха культуры и нейтрализуется альфа-антиток¬сической сывороткой. Он выявляется на средах с кроличьими и бараньими эритроцитами
Бета-гемолиз на агаре с бараньей кровью дает частичное просветление, зона которого имеет буровато-пурпурный оттенок. Это «тепло-холодовый» токсин и лучше выявляется после до¬полнительного суточного выдерживания чашек в холодильнике при температуре +4 °С по характерному послойному гемолизу бараньих эритроцитов и не централизуется альфа-антитоксиче¬ской сывороткой. На кроличьих эритроцитах он не активен. Дельта-гемолизин определяется по узкой полоске гемолиза бараньих и кроличьих эритроцитов, не нейтрализуется альфа-антитоксической сывороткой. Однако образование дельта-гемоли-зина на этих чашках может быть замаскировано действием аль¬фа-токсина и поэтому его следует проверять на средах с эритро¬цитами человека или лошади. Таким образом, для определения всех 3 типов гемолизинов достаточно использовать эритроциты барана и человека или лошади.
Для определения вирулентности ста¬филококков существуют несколько различных методов заражения белых мышей.
Наиболее простым является введение 0,1 мл суточной бульон¬ной культуры испытуемого стафилококка в хвостовую вену. Учет гибели животных осуществляется в течение 10 суток, регистри¬руют наличие абсцессов в почках.
Удобно пользоваться способом Badenski и сотр. (1958), Су¬точная бульонная культура центрифугируется при 3000 об/мин — 30 мин. Полученный осадок ресуспендируется в половинном объ¬еме декантата и в количестве 0,05 мл вводится 6 мышам позади глазного яблока в окологлазничную клетчатку. Культуру, вызы¬вающую гибель половины и более зараженных мышей в течение 6 дней, считают вирулентной.
При этих методах заражения вирулентной куль¬турой у животных развивается общин септический процесс с преимущественным поражением почек. Основная гибель мышеи происходит на 3—5-й день после заражения.
Другие способы заражения белых мышей (внутрибрюшинный и интраназальный) требуют в десятки
раз большей заражающей дозы, максимум гибели мышей приходится на 1—2-е сутки, что характери¬зует преимущественно токсический компонент про¬цесса (С. А. Анатолий, И. И. Антоновская, 1967).
В то же время ряд исследователей отдают пред¬почтение более простому технически внутрибрюшинному способу заражения мышей, который одновре-менно позволяет изучать клеточные и гуморальные механизмы развития инфекции.
Сопоставление вирулентности стафилококков для белых мышей с отдельными факторами их патогенности показало, что вирулентность штаммов, по дан¬ным большого числа исследователей, коррелирует с уровнем альфа-гемотоксина. Что касается других признаков патогенности и их корреляции с вирулент¬ностью, то получены разноречивые сведения. Так, по данным С. А. Анатолия (1969), вирулентность штам¬мов коррелировала с продукцией бета-гемолизина, летального фактора, лецитовителлазы, гиалуронидазы и коагулазы. А. К. Акатов (1968) не отмечает кор¬реляции вирулентности с коагулазной, лециговител-лазной, фибринолитической активностью, не установ¬лена корреляция с дельта-токсигенностью.
Для сравнения вирулентности стафилококковых культур можно использовать их способность вызы¬вать дермонекротическую реакцию у кроликов.
Готовят 4-миллиардную взвесь суточной агаровой культуры стафилококка в физиологическом растворе, а из полученной гу¬стоты делают разведения, чтобы получить 2- и 1-миллиардные взвеси. Из каждого разведения в объеме 0,1 мл, что составляет 100, 200, 400 миллионов микробных тел, вводят кролику в вы-стриженную или депилированную накануне кожу. На одном кро¬лике можно одновременно поставить до 8 внутрикожных проб. Ежедневно отмечают проявления дермонекротической реакции, а окончательно на 4-е сутки. За минимальную дермонекротиче¬скую дозу принимают то наименьшее количество культуры, кото¬рое дает некроз на 4-е сутки (Г. В. Выгодчиков, 1963).

Список использованной литературы
1. А.М.Смирнова, А.А.Трояшкин, Е.М.Падерина: микробиология и профилактика стафилококковых инфекций – «Медицина», 1977.
2. Стафилококковые инфекции: российский сб. науч. тр. – С.-П., 1991.
3. А.М.Смирнова: вопросы иммунологии и микробиологии стафилококковых и стрептококковых инфекций – Ленинград, 1975.
4. Лекция по теме.
5. Методическая разработка кафедры.
Похожие материалы:

Добавление комментария

Ваше Имя:
Ваш E-Mail:

Код:
Включите эту картинку для отображения кода безопасности
обновить, если не виден код
Введите код: