Реферат: Иммунологические методы исследования

Med-books.by - Библиотека медицинской литературы. Книги, справочники, лекции, аудиокниги по медицине. Банк рефератов. Медицинские рефераты. Всё для студента-медика.
Скачать бесплатно без регистрации или купить электронные и печатные бумажные медицинские книги (DJVU, PDF, DOC, CHM, FB2, TXT), истории болезней, рефераты, монографии, лекции, презентации по медицине.


=> Книги / Медицинская литература: Акупунктура | Акушерство | Аллергология и иммунология | Анатомия человека | Английский язык | Анестезиология и реаниматология | Антропология | БиоХимия | Валеология | Ветеринария | Внутренние болезни (Терапия) | Военная медицина | Гастроэнтерология | Гематология | Генетика | География | Геронтология и гериатрия | Гигиена | Гинекология | Гистология, Цитология, Эмбриология | Гомеопатия | ДерматоВенерология | Диагностика / Методы исследования | Диетология | Инфекционные болезни | История медицины | Йога | Кардиология | Книги о здоровье | Косметология | Латинский язык | Логопедия | Массаж | Математика | Медицина Экстремальных Ситуаций | Медицинская биология | Медицинская информатика | Медицинская статистика | Медицинская этика | Медицинские приборы и аппараты | Медицинское материаловедение | Микробиология | Наркология | Неврология и нейрохирургия | Нефрология | Нормальная физиология | Общий уход | О достижении успеха в жизни | ОЗЗ | Онкология | Оториноларингология | Офтальмология | Паллиативная медицина | Паразитология | Патологическая анатомия | Патологическая физиология | Педиатрия | Поликлиническая терапия | Пропедевтика внутренних болезней | Профессиональные болезни | Психиатрия-Психология | Пульмонология | Ревматология | Сестринское дело | Социальная медицина | Спортивная медицина | Стоматология | Судебная медицина | Тибетская медицина | Топографическая анатомия и оперативная хирургия | Травматология и ортопедия | Ультразвуковая диагностика (УЗИ) | Урология | Фармакология | Физика | Физиотерапия | Физическая культура | Философия | Фтизиатрия | Химия | Хирургия | Экологическая медицина | Экономическая теория | Эндокринология | Эпидемиология | Ядерная медицина

=> Истории болезней: Акушерство | Аллергология и иммунология | Ангиология | Внутренние болезни (Терапия) | Гастроэнтерология | Гематология | Гинекология | ДерматоВенерология | Инфекционные болезни | Кардиология | Наркология | Неврология | Нефрология | Онкология | Оториноларингология | Офтальмология | Педиатрия | Профессиональные болезни | Психиатрия | Пульмонология | Ревматология | Стоматология | Судебная медицина | Травматология и ортопедия | Урология | Фтизиатрия | Хирургия | Эндокринология

=> Рефераты / Лекции: Акушерство | Аллергология и иммунология | Анатомия человека | Анестезиология и реаниматология | Биология | Биохимия | Валеология | Ветеринария | Внутренние болезни (Терапия) | Гастроэнтерология | Гематология | Генетика | Гигиена | Гинекология | Гистология, Цитология, Эмбриология | Диагностика | ДерматоВенерология | Инфекционные болезни | История медицины | Лечебная физкультура / Физическая культура | Кардиология | Массаж | Медицинская реабилитация | Микробиология | Наркология | Неврология | Нефрология | Нормальная физиология | Общий уход / Сестринское дело | Озз | Онкология | Оториноларингология | Офтальмология | Патологическая анатомия | Педиатрия | ПатоФизиология | Профессиональные болезни | Психиатрия-Психология | Пульмонология | Ревматология | Скорая и неотложная медицинская помощь | Стоматология | Судебная медицина | Токсикология | Травматология и ортопедия | Урология | Фармакогнозия | Фармакология | Фармация | Физиотерапия | Фтизиатрия | Химия | Хирургия | Эндокринология | Эпидемиология | Этика и деонтология

=> Другие разделы: Авторы | Видео | Клинические протоколы / Нормативная документация РБ | Красота и здоровье | Медицинские журналы | Медицинские статьи | Наука и техника | Новости сайта | Практические навыки | Презентации | Шпаргалки


Med-books.by - Библиотека медицинской литературы » Рефераты: Аллергология и иммунология » Реферат: Иммунологические методы исследования

Реферат: Иммунологические методы исследования

0

Скачать бесплатно реферат:
«Иммунологические методы исследования»


Содержание

Предисловие
Введение
. Области использования иммунодиагностики
. Иммунологические методы в диагностике заболеваний иммунной системы
.1 Количественное определение популяций лимфоцитов
.1.1 Проточная цитометрия
.1.2 CD-классификация мембранных молекул иммунокомпетентных клеток
.1.2 Маркеры активации лимфоцитов
.2 Методы оценки функциональной активности лимфоцитов
.2.1 Определение пролиферативной способности лимфоцитов
.2.2 Определение цитотоксической активности Т-лимфоцитов
.2.3 Оценка ГЗТ in vivo
.2.4 Оценка цитотоксической активности естественных киллеров
.2.5 Методы количественного определения иммуноглобулинов
.3 Методы исследования функций фагоцитов
.3.1 Методы определения хемотаксиса лейкоцитов
.3.2 Определение адгезивных свойств
.3.3 Определение фагоцитарной способности
.3.4 Оценка бактерицидной активности
.4 Методы оценки системы комплемента
. Иммунологические методы, основанные на реакции антиген-антитело
.1 Иммуноферментный анализ
.2 Радиоиммунный анализ
.3 Иммунофлюоресцентный анализ
. Методы исследования цитокинов
Заключение
Вопросы для самоконтроля
Задания в тестовой форме
Словарь иммунологических терминов
Библиографический список


Предисловие

Согласно определению ВОЗ клиническая иммунология - это клиническая и лабораторная дисциплина, занимающаяся изучением вопросов диагностики и лечения больных с различными заболеваниями и патологическими состояниями, в основе которых лежат иммунологические механизмы, а также состояниями, в терапии и профилактике которых иммуноактивные препараты играют ведущую роль. Обращает на себя внимание то, что иммунология - это и лабораторная дисциплина. Сложилось так, что иммунологические методы используются очень широко в различных областях медицины. Главным образом, это методы, основанные на иммунных реакциях (антиген+антитело, ГЗТ). Одной из задач клинической иммунологии в современной медицине является обогащение ее иммунологическими подходами к диагностике и лечению заболеваний.
Данное пособие адресовано студентам лечебного и педиатрического факультетов, изучающим клиническую иммунологию, в частности, при подготовке по разделу 2 «Оценка иммунного статуса. Иммунодиагностика», темы 2 «Методы оценки иммунного статуса и их клиническая интерпретация» учебно-методического плана. Пособие содержит развернутый систематизированный материал по данной теме, освещающий возможности современной иммунодиагностики, области использования иммунологических методов в различных областях клинической медицины, методологию иммунодиагностики основных заболеваний иммунной системы, основные иммунологические методы.
Настоящее учебное пособие будет способствовать формированию представлений о принципах иммунодиагностики; приобретению знаний о показаниях для исследования иммунного статуса, количественных и функциональных тестах оценки Т-клеточного, В-клеточного иммунитета, НК-клеток, фагоцитоза, комплемента и их клинического значение, умений определять показания для исследования иммунного статуса, интерпретировать основные показатели иммунного статуса.
Изучение данного вопроса предполагает преемственность и базируется на знаниях, приобретенных студентами на младших курсах при изучении смежных дисциплин (микробиология, общая биология, и др.). В то же время, полученные студентами знания могут быть востребованы при изучении целого ряда других клинических дисциплин образовательной программы (гематология, трансплантология, онкология, инфекционные болезни и др.).
Настоящее пособие посвящено 2 и 3 разделам рабочей программы по дисциплине “клиническая иммунология”.

Введение

Впервые методология иммунодиагностики заболеваний иммунной системы была разработана в нашей стране Р.В. Петровым и соавторами, опубликовавшими в 1984 г. методические рекомендации «Оценка иммунного статуса человека». В соответствии с этими методическими рекомендациями все методы иммунодиагностики разделены на тесты I и II уровней. Тесты I уровня направлены на идентификацию грубых поломок иммунной системы, т.е. первичных иммунодефицитов; тесты II уровня - на углубленное изучение функционального состояния иммунной системы.
К тестам I уровня относят:
определение функциональной активности фагоцитов;
определение численности основных популяций и субпопуляций лимфоцитов;
определение концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови.
К тестам II уровня относятся:
определение субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов;
тест торможения миграции лейкоцитов с использованием в качестве стимулятора ФГА (фитогемагглютинина);
- оценка пролиферативной активности Т- и В- лимфоцитов на митогены, антигены, аллогенные клетки;
оценка активности киллерных лимфоцитов;
выявление циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК);
- определение различных компонентов комплемента;
- оценка различных этапов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов;
- тесты по определению медиаторов иммунной системы, в том числе продукции и рецепции интерлейкинов;
- анализ генов, ответственных за экспрессию иммунологически значимых молекул.
В пособии приведены современные принципы оценки состояния основных звеньев иммунной системы человека для диагностики нарушений иммунной системы при иммунопатологических состояниях. Представлен краткий обзор современных лабораторных методов, используемых в иммунологии. Также охарактеризованы возможности использования иммунологических методов в различных областях клинической медицины.

1. Области использования иммунодиагностики

Представляем данные об использовании иммунологических методов в разных областях медицины. Современная диагностика любого инфекционного заболевания основывается на обнаружении возбудителя болезни (бактериологические методы, ПЦР) или на выявлении специфического иммунного ответа на возбудителя (антитела, ГЗТ). Так, в диагностике ВИЧ-инфекции выявление антител с помощью ИФА является скрининговым методом, а подтверждающим - иммуноблотинг, позволяющий идентифицировать антитела к различным антигенам вируса. Все вирусные, многие бактериальные инфекции диагностируют путем выявления специфических антител (IgM и IgG) к поверхностным антигенам микроорганизмов. ГЗТ чаще оценивают in vivо, например, в диагностике туберкулеза.
Эндокринология, гематология и другие области внутренней медицины широко используют иммунологические методы в диагностике.
Верификация опухолевого клона в диагностике онкологических и онкогематологических заболеваний проводится морфологическими методами («золотой» стандарт) и путем фенотипирования опухолевых клеток. Иммунофенотипирование клеток - это определение поверхностных маркёров и, соответственно, принадлежности клеток к той или иной субпопуляции. Традиционные морфологические и цитохимические исследования клеток субстрата болезни (кровь, красный костный мозг, лимфатические узлы, селезёнка и т.д.) во многих случаях, особенно при лимфопролиферативных заболеваниях, не позволяют выявить всё многообразие вариантов среди морфологически сходных форм и установить источник происхождения патологического клона. Эти задачи могут быть решены только путём изучения иммунологической характеристики клеток. При неопластических изменениях блок дифференцировки может произойти на любой стадии нормального развития клеток, в результате чего образуется клон патологических клеток, определяющих субстрат болезни и имеющих одинаковую иммунологическую (или фенотипическую) характеристику. Проведя исследования этих маркёров на клетках, можно определить, какой форме и варианту заболевания они соответствуют, то есть на основе иммунологического фенотипа клеток проводить дифференциальную диагностику, которая наиболее трудна при лимфопролиферативных заболеваниях, потому что основной клеткой патологического субстрата болезни являются морфологически почти однотипные клетки. В диагностике минимальной резидуальной болезни (МРБ) могут использоваться иммунологические методы, в частности, иммунофенотипирование методом проточной цитометрии. Минимальной резидуальной или минимальной остаточной болезнью называют небольшую популяцию опухолевых клеток, которая не может быть зафиксирована с помощью морфологических методов, но обнаруживается более тонкими методами исследования, выявляющими 0,03%- 0,5% клеток аберрантного фенотипа.
Определение концентрации различных биологически-активных веществ: гормонов, онкофетальных антигенов, витаминов и других молекул, не определяемых стандартными биохимическими методами, может осуществляться только на основе иммунологических методов (главным образом, ИФА).

2. Иммунологические методы в диагностике заболеваний иммунной системы

Для объективной оценки состояния иммунной системы человека введено понятие об иммунном статусе. Иммунный статус - это комплекс показателей, характеризующих субпопуляционный состав лимфоцитов, гуморальный и клеточный иммунитет, фагоцитарное звено, то есть практически всю иммунную систему человека в данный момент времени. Исследование иммунного статуса проводится с целью уточнения диагноза, определения тактики лечения и прогноза при первичных иммунодефицитах, ВИЧ-инфекции и других вторичных иммунодефицитах, аутоиммунных, аллергических заболеваниях.
Иммунодиагностика предполагает идентификацию нарушенного звена иммунной системы, индивидуальна для данного заболевания у конкретного больного. Наибольшее значение иммунодиагностика имеет при иммунодефицитах. При аутоиммунных заболеваниях иммунологические методы применяются для подтверждения клинического диагноза: например определение аутоантител. При аллергических заболеваниях иммунодиагностика позволяет выявить причинный аллерген и определяет возможности аллерген-специфической иммунотерапии. Дальнейшее изучение дисциплины, а именно частных вопросов иммунопатологии, предполагает анализ результатов исследования иммунного статуса для постановки диагноза и показаний к терапии.
Для оценки иммунной системы человека рекомендованы следующие основные методы (ВОЗ, 1993):
. Т-лимфоциты
определение субпопуляций
оценка пролиферации in vitro на митогены
оценка цитотоксичности
оценка эффекторов ГЗТ
кожные тесты с микробными АГ in vivo
. В-лимфоциты
определение количества В-клеток
иммуноглобулины, субклассы
иммунные комплексы
оценка пролиферации in vitro
оценка продукции АТ разной специфичности
. Моноциты/макрофаги
фагоцитоз
хемотаксис
адгезия
4. Неспецифические факторы защиты
компоненты системы комплемента
белки острой фазы
. Цитокины
определение концентрации цитокинов в сыворотке
определение растворимых рецепторов цитокинов
определение внутриклеточных цитокинов.
Далее приведены основные иммунологические методы, используемые для оценки иммунной системы человека.
Основными объектами для иммунологического обследования являются иммунокомпетентные клетки (Т-, В, NK-лимфоциты, моноциты),получаемые из периферической крови, а также регуляторные и эффекторные молекулы (цитокины, комплемент и др.) из сыворотки (плазмы) крови. В некоторых случаях исследуются иммунокомпетентные клетки и регуляторные молекулы из тканей и различных биологических жидкостей.

2.1 Количественное определение популяций лимфоцитов

.1.1 Проточная цитометрия
Определение содержания основных популяций лимфоцитов (морфологически представляющие собой единообразные клетки) основано на выявлении поверхностных антигенов (дифференцировочных антигенов).
В настоящее время для определения поверхностных антигенов лимфоцитов (иммунофенотипирование) применяются моноклональные антитела, меченные флюорохромом, и проточный цитофлюориметр.
Метод получения моноклональных антител (МАТ), который предложили в 1975 г. Георг Келер и Цезарь Мильштейн, быстро стал одной из ключевых иммунологических технологий. Путем слияния нормальных активированных антителопродуцирующих В-лимфоцитов и миеломных клеток (плазматических опухолевых клеток) образована гибридная клетка, названная гибридомой, которая обладает способностью неограниченного роста миеломной клетки и секретирует антитела как В-клетка. Значение работы Келера и Мильштейна было признано Нобелевской премией (1984 г.)
Логика получения моноклональных анител проста: необходимо изолировать единственную антителопродуцирующую клетку, обеспечив ее длительное размножение и функционирование. Проблему решает гибридома - соматический гибрид между В-лимфоцитами и опухолевыми клетками. Получение гибридом сводится к следующему. Мышей иммунизируют антигеном. Через несколько дней, когда в лимфоидной ткани накапливаются активированные лимфоциты, из селезенки готовят взвесь клеток, которые используют для гибридизации. Спленоциты смешивают с миеломными клетками в присутствии агента, способствующего слиянию клеточных мембран. Отбирают «успешные» клеточные гибриды, которые секретируют антитела требуемой специфичности. Размножаясь, они дают начало «бессмертным» клонам, продуцирующим моноколональные антитела.
Моноклональные антитела используются не только для выявления разных типов клеток, но и для изучения процессов дифференцировки, созревания, межклеточного взаимодействия и активации лимфоцитов. Проточный цитофлюориметр - прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и оптическим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновременной оценки многих параметров клетки: размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Результаты исследования выражают в виде абсолютного и относительного числа лимфоцитов разных популяций. Оценку результатов проводят с учетом нормальных показателей, которые зависят от возраста, пола и расы. Простой способ проверки надежности результатов заключается в том, что относительное содержание основных популяций лимфоцитов (Т, В и НК-лимфоцитов) в сумме должно составлять 100%. В норме у взрослых около 70% лимфоцитов крови составляют Т-лимфоциты, при этом соотношение лимфоцитов CD4/CD8 превышает 1, как правило, оно составляет 1,5-2,0 остальные 30% приходятся на В- и НК-лимфоциты.
Метод применяется для определения субпопуляций лимфоцитов (например, содержание лимфоцитов CD 4 при ВИЧ-инфекции), оценки функциональной состоятельности иммунокомпетентных клеток (фагоцитарная активность, определение внутриклеточных цитокинов). Этот метод применяется также для выявления других изменений клеточного состава крови и определения активированных лимфоцитов, определения антигенов гистосовместимости. Проточная цитофлюориметрия применяется также для анализа ДНК при исследовании клеточного цикла. Проточная цитофлюориметрия является стандартным методом диагностики гемобластозов, поскольку позволяет определить тип и стадию дифференцировки трансформированных клеток. В онкологии метод находит применение, в частности, для определения специфических маркеров.

.1.2 CD-классификация мембранных молекул иммунокомпетентных клеток
CD3 - главный маркер зрелых Т-клеток. Кроме CD3, на мембране Т-клеток экспрессируются CD2, CD5, CD7. CD4 является корецепторной структурой TCR, представлена на Т-клетках-хелперах и участвует в распознавании антигена в контексте с молекулами MHC II. Молекула CD8 представлена на Т-киллерах и участвует в распознавании антигена в контексте с молекулами MHC I.
CD3 входит в состав Т-клеточного рецептора, (TCR), распознающего антиген. CD3+CD4+ - субпопуляция Т-хелперов; CD3+CD8+ - цитотоксические Т-клетки. Молекула CD19 экспрессируется только на В-клетках и ее идентификация рекомендуется для количественной оценки общей популяции В-лимфоцитов. CD20 экспрессируется на ранних этапах развития В-клеток, начиная с про-В-клеток. CD16 участвует в антителозависимой цитотоксичности, осуществляемой NK. NK-клетки имеют фенотип CD3-CD16+CD56+.
Основные CD-маркеры иммунокомпетентных клеток следует знать, так как они являются обязательным составляющим компонентом иммунограмм.

.1.2 Маркеры активации лимфоцитов
Молекулы HLA-DR экспрессируются в основном на антиген-представляющих клетках (АПК) - моноцитах/макрофагах, дендритных клетках, В-клетках, и на лимфоцитах - CD4+, CD8+. Повышение экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах происходит при воспалительных процессах под действием цитокинов. Молекула CD25 представляет собой α-цепь рецептора ИЛ-2. Повышение количества CD25-позитивных лимфоцитов может говорить о воспалительном процессе любой природы (инфекционный, аутоиммунный процессы). CD45RA экспрессируется на наивных Т-клетках, В-клетках, CD45RO - на эффекторных Т-клетках, Т-клетках памяти, В-клетках, моноцитах и макрофагах Содержание активированных Т-лимфоцитов может повышаться при иммунной активации, вызванной инфекцией или отторжением трансплатата.
Согласно рекомендациям ВОЗ (1988) определение содержания основных популяций лимфоцитов имеет диагностическое значение при первичных, вторичных иммунодефицитах, ВИЧ-инфекции, лимфопролиферативных заболеваниях.
Большое значение имеет определение субпопуляций лимфоцитов, прежде всего CD4+ клеток, при ВИЧ-инфекции. Определение уровня CD4-лимфоцитов позволяет судить о глубине развившегося у больного иммунодефицита. Степень снижения уровня CD4-клеток может служить критерием для вероятности возникновения вторичных заболеваний. Стойкое снижение этого показателя до 500 кл в мкл ассоциируется с переходом в стадию вторичных заболеваний. Так, саркома Капоши может впервые появиться при уровне CD4-лимфоцитов более 200 кл в мкл, а пневмоцистная пневмония обычно появляется при их уровне менее 200 кл в мкл. При успешной антирертровирусной терапии уровень CD4-лимфоцитов начинает повышаться.
Клинический пример. Пациент 22 лет госпитализирован в инфекционную больницу с диагнозом «лакунарная ангина, паратонзиллит». На фоне лечения антибиотиками состояние больного улучшилось и он был выписан через 7 дней лечения (при обследовании на антитела к ВИЧ результаты отрицательные). Через 1 неделю он был повторно госпитализирован с температурой тела 38оС и жалобами на боль в горле. При осмотре диагностирован паратонзиллярный абсцесс, а при лабораторном исследовании обнаружены антитела к ВИЧ. Больной переведен в специализированный стационар. Начата антиретровирусная терапия.В течение 2 месяцев на фоне антибактериального лечения у него развивались рецидивы и трижды производилось вскрытие паратонзиллярного абсцесса (с выделением из содержимого абсцесса культуры Escherichia coli). В это время отмечалось значительное снижение уровня CD-лимфоцитов (210 кл в мкл). В дальнейшем, через 2 месяца после выписки, уровень CD-клеток стал более высоким (380 кл в мкл).
Клинический пример. У больного диагностирована ВИЧ-инфекция в возрасте 47 лет. В течение 5 лет с момента установления диагноза самочувствие было удовлетворительным. Обратился за медицинской помощью в связи с появлением выраженной лихорадки, кашля с мокротой, изменениями на рентгенограмме органов грудной клетки; был диагностирован инфильтрированный туберкулез легких и назначены специфические противовирусные и противотуберкулезные препараты, которые получал в течение 6 мес. При выписке уровень CD4-клеток составил 110 кл в мкл. Несмотря на это, больной исчез из поля зрения врачей на 3 мес. Вновь был госпитализирован в тяжелом состоянии: температура тела 38оС, больной истощен, на коже лица, шеи, туловища, конечностей множественные узловые элементы разных размеров с некрозами и кровоточивостью. Уровень CD-4 клеток 0. Клинический диагноз: ВИЧ-инфекция в стадии СПИД, двусторонний инфильтративный туберкулез легких, саркома Капоши. Несмотря на начатое лечение, больной умер через 6 дней от начала госпитализации.

.2 Методы оценки функциональной активности лимфоцитов

.2.1 Определение пролиферативной способности лимфоцитов
Ответ лимфоцитов на действие антигенов имеет клональный характер,
поскольку лишь клетки конкретных клонов несут на своей поверхности рецепторы для определенных антигенов. Интенсивное деление лимфоцитов определенных клонов после распознавания ими антигена должно обеспечить эффективный иммунный ответ. Оценка способности лимфоцитов к пролиферативному ответу in vitro в ответ на стимуляцию является важным показателем их функциональной активности. В лабораторных условиях для стимуляции лимфоцитов используют поликлональные стимуляторы - митогены, на них отвечают практически все представители лимфоцитов. Специфичным для Т-клеток является фитогемагглютинин (ФГА) и конканавалин А (КонА). В-клеточным митогеном является митоген лаконоса (МЛ) и липолисахарид (ЛПС).
Для оценки пролиферации используются различные методы - морфологический, радиометрический, цитофлуориметрический. Наиболее распространенным способом оценки пролиферации является оценка включения Н3-тимидина, которая позволяет объективно оценить изменение пролиферативного ответа клеток.
Принцип метода состоит в культивировании лимфоцитов в присутствии митогена с последующим добавлением Н3-тимидина и оценкой его включения в пролиферирующие клетки. Поскольку репликация ДНК - неотъемлимая и обязательная часть процесса пролиферации, считается, что включение Н3-тимидина может служить мерой пролиферации.
Оценка пролиферативного ответа на действие митогенов считается наиболее универсальным тестом для оценки функции лимфоцитов. Отсутствие реакции на митогены свидетельствует о тяжелой недостаточности клеточного иммунитета.

.2.2 Определение цитотоксической активности Т-лимфоцитов
Исследуют ограниченную по HLA цитотоксичность CD8 клеток. Исследуемые T-лимфоциты предварительно инкубируют с антигеном, присутствующим на клетках-мишенях. Клетками-мишенями служат собственные клетки, несущие на своей поверхности чужеродный антиген, связанный с антигенами HLA I класса. Оценку цитотоксической активности лимфоцитов проводят следующим образом: 1) клетки-мишени обрабатывают радиоактивной меткой (51cr); 2) к меченым клеткам-мишеням добавляют исследуемые лимфоциты; 3) гибель клеток-мишеней оценивают по выходу радиоактивной метки в раствор. Полученные результаты сравнивают с нормальными показателями.

.2.3 Оценка ГЗТ in vivo
Кожные пробы позволяют оценить способность Т-лимфоцитов вызывать реакцию замедленного типа при внутрикожном введении антигена. Размеры эритемы и папулы в месте инъекции определяют через 24 и 48 ч. Поскольку отрицательная реакция может быть следствием не только нарушения иммунитета, но и отсутствия предшествующего контакта с данным антигеном, пробу проводят с набором широко распространенных антигенов, в который входят очищенный туберкулин , столбнячный и дифтерийный анатоксины . Отрицательная реакция на несколько распространенных антигенов у больных с оппортунистическими инфекциями свидетельствует о выраженной недостаточности клеточного иммунитета.
Снижение функциональной активности Т-лимфоцитов приводит к клиническим проявлениям инфекций, вызываемых внутриклеточными бактериями, вирусами, грибами, простейшими (пневмония, вызываемая Pneumocystic carinii, цитомегаловирусная инфекция, токсоплазмоз, криптоспоридиоз и др.); опухолевому росту.
Активация клеточных эффекторных функций может лежать в основе воспаления при аллергии (контактный дерматит) и аутоиммуных заболеваниях (ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз).

.2.4 Оценка цитотоксической активности естественных киллеров
В лабораторной практике используется метод определения функции естественных киллеров, основанный на оценке их способности лизировать трансформированные клетки, предварительно меченные радионуклидами или флуорохромами. В качестве клеток-мишеней используются клетки линии эритромиелоидного лейкоза человека К562 как высокочувствительные к литическому действию естественных киллеров. Принцип метода основан на оценке цитолиза меченых клеток-мишеней после их кратковременной инкубации с клеточными суспензиями, содержащими естественные киллеры. Цитолиз оценивается по выходу радиоактивной метки (Cr 51), предварительно введенной в клетки.
Снижение цитотоксической активности НК-лимфоцитов выявляется при многих заболеваниях, в том числе при злокачественных новообразованиях, а отсутствие наблюдается крайне редко.

.2.5 Методы количественного определения иммуноглобулинов
Количественное содержание иммуноглобулинов является основным показателем гуморального иммунитета. Уровень иммуноглобулинов - один из показателей, используемых для оценки иммунного статуса человека. Все методы, применяемые для количественного определения иммуноглобулинов, основаны на взаимодействии антиген-антитело:
иммунодиффузия в геле (можно определять IgG, IgA, IgM, IgD)
иммуноэлекрофорез (можно определять IgG, IgA, IgM, IgD)
фотометрия (можно определять IgG, IgA, IgM, IgD)
иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ (все классы и субклассы иммуноглобулинов, IgE, секреторные иммуноглобулины, специфические антитела).
Иммунодиффузия в геле основана на использовании гелевых носителей для локализации образующегося в результате взаимодействия антигена и антитела преципитата, который выпадает в виде визуально определяемых полос или зон. Метод простой радиальной иммунодиффузии был впервые предложен Манчини в 1963 г. Принцип метода заключается в том, что на ровную поверхность равномерным слоем наносят гель, содержащий антитела (антитела к иммуноглобулинам). В геле вырезают лунки и заполняют их раствором антигена (иммуноглобулины в составе сыворотки крови или другой биологической жидкости). Молекулы антигена радиально диффундируют из лунки и, встретившись с антителами, образуют кольцо преципитации. Площадь кольца прямо пропорциональна концентрации геля в лунке. Этот метод рекомендован ВОЗ (1981) при подозрении на наличие первичного иммунодефицита.
К фотометрическим методам определения иммуноглобулинов относят нефелометрию и турбидиметрию. Взаимодействие раствора антигена с моноспецифической сывороткой приводит к образованию иммунных комплексов. Эти иммунные комплексы рассеивают проходящий световой поток, интенсивность которого можно измерить. Нефелометрия регистрирует световой поток, который рассеивается под определенным углом иммунными комплексам, взвешенными в оптически прозрачной среде. Турбидиметрия регистрирует свет, поглощаемый комплексами антиген-антитело. Интенсивность рассеянного света или разность светового потока прямо пропорциональна величине и числу иммунных комплексов.
При изучении данного раздела следует ознакомиться с лабораторными методами определения иммуноглобулинов. Основное внимание уделить клинической интерпретации вариантов изменения содержания иммуноглобулинов сыворотки крови при патологии. Так, снижение концентрации иммуноглобулинов может привести к клиническим проявлениям острых и хронических бактериальных инфекций. Подобная симптоматика сопровождает врожденные иммунодефициты и приобретенные, развивающиеся при дефиците питания, потере белка при почечной недостаточности, травме, миеломной болезни, недоношенности новорожденных и др. Дефицит IgA клинически ассоциируется с хроническими неспецифическими воспалительными заболевания респираторного тракта. Недостаток IgG2 субкласса часто приводит к клиническим проявлениям инфекций респираторного тракта (антитела против Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenzae). Повышение концентрации иммуноглобулинов, в частности IgG, наблюдается при нфекционных заболеваниях, хроническом гепатите, аутоиммунных заболеваних. Повышение IgM отмечают при инфекциях, IgM плазмоцитомах, заболеваниях печени, аутоиммунных заболеваниях, синдроме Вальденстрема.
Концентрация IgЕ в сыворотке крови повышается при аллергических заболеваниях, паразитозах, некоторых опухолевых и аутоиммунных заболеваниях. В силу вышесказанного, правильная интерпретация данных лабораторного анализа содержания иммуноглобулинов сыворотки крови пациента возможна только в результате всестороннего анализа клинических данных.

.3 Методы исследования функций фагоцитов

С помощью лабораторных методов можно оценить следующие функции моноцитов и макрофагов: представление антигена Т-лимфоцитам, антителозависимую клеточную цитотоксичность, противоопухолевую цитотоксичность, хемотаксис, фагоцитоз и бактерицидную активность. Кроме того, можно исследовать продукцию цитокинов активированными макрофагами.
Исследуют такие функции нейтрофилов, как хемотаксис, адгезию, фагоцитоз, бактерицидную активность и продукцию свободных радикалов кислорода.

.3.1 Методы определения хемотаксиса лейкоцитов
Направленное движение лейкоцитов в сторону стимулирующего агента - хемоаттраканта называется хемотаксисом. Хемотаксис нейтрофилов исследуют с помощью камеры Бойдена. Эта камера состоит из двух отделений, между которыми находится фильтр. В одно отделение камеры помещают суспензию нейтрофилов, в другое - хемотаксический фактор, например С5a. После инкубации нейтрофилов в камере Бойдена определяют, какое их количество мигрировало на противоположную сторону фильтра. Для исследования хемотаксиса нейтрофилов in vivo используется метод кожного окна. С помощью скальпеля удаляют поверхностный слой эпидермиса площадью 4 мм2 (при этом должно появиться небольшое количество крови). На поврежденный участок помещают покровное стекло. В течение суток каждые 0,5-2 ч покровное стекло меняют. Затем стекла окрашивают и исследуют под микроскопом находящиеся на них лейкоциты. В норме в течение первых 2 ч наблюдается приток нейтрофилов к месту повреждения. В течение последующих 12 ч нейтрофилы замещаются моноцитами.
Нарушения хемотаксиса наблюдают при ряде врожденных заболеваний фагоцитарной системы: синдромах Чедиака-Хигаси, дефектах адгезии лейкоцитов, при вторичных иммунодефицитных состояниях.

.3.2 Определение адгезивных свойств
За адгезивные свойства нейтрофилов и моноцитов отвечают поверхностные рецепторы - селектины и интегрины. Обычно определяют экспрессию поверхностных антигенов CD11a, CD18, CD11b, CD11c с помощью моноклональных антител в методе проточной цитометрии. При иммунодефицитах, обусловленных нарушением адгезии лейкоцитов, наблюдается снижение экспрессии этих антигенов, как на покоящихся, так и на активированных клетках. Для определения функциональной активности адгезивных молекул фагоцитов используется оценка их способности прикрепляться к пластику, стеклу, культуре эпителиальных клеток.
Нарушение адгезивных свойств фагоцитирующих клеток наблюдают при врожденных синдромах, связанных с нарушением экспрессии молекул адгезии - ЛАД-синдром I-го и II-го типа. К лабораторным признакам этих иммунодефицитов относится также нейтрофильный лейкоцитоз. Иммунодефициты, обусловленные нарушением адгезии лейкоцитов, проявляются рецидивирующими инфекциями, медленным заживлением ран и отсутствием гнойного отделяемого в очагах инфекции.
Похожие материалы:
    Иммунологические методы - Фримель Г. - 1987 год - 472 с. Иммунологические методы - Фримель Г. - 1987 год - 472 с.
    Описание: В книге представлены современные методы клинической и экспериментальной иммунологии. Рассмотрены принципы определения активности антител, реакции антиген-антитело, электрофоретическое исследование белков, культивирование лимфоцитов и других

    Оценка иммунного статуса - Новиков Д.К, Новикова В.И. - 1996 год - 282 с. Оценка иммунного статуса - Новиков Д.К, Новикова В.И. - 1996 год - 282 с.
    В книге изложены принципы оценки иммунного статуса при различных видах иммунопатологии: иммунодефицитах, аллергии, аутоиммунных заболеваниях, нарушениях репродукции и опухолях. Обоснован клинико-лабораторный подход их диагностики, предложены конкретные

    Клиническая иммунология - Соколов Е.И. - 1998 год - 45 с. Клиническая иммунология - Соколов Е.И. - 1998 год - 45 с.
    Описание: Состоит из двух частей: основы общей иммунологии и клиническая иммунология. В руководстве изложены современные представления о строении и функции иммунной системы. Рассмотрен вклад иммунных механизмов в патогенез различных заболеваний. Описаны

    Оценка иммунного статуса человека в условиях воздействия химического и биол ... Оценка иммунного статуса человека в условиях воздействия химического и биол ...
    Цель пособия — создание комплекса стандартных и унифицированных тестов оценки иммунного статуса человека для изучения влияния на иммунитет различных химических и биологических факторов антропогенной природы. В первой главе представлена методология

    Лимфоциты: Методы - Клаус Дж. - 1990 год - 395 с. Лимфоциты: Методы - Клаус Дж. - 1990 год - 395 с.
    Описание: Методическое пособие написанное авторитетными учеными из Великобритании, Норвегии и Швейцарии. Подробно рассматривается выделение лимфоцитов из разных источников, методы очистки клеток и определение их жизнеспособности, разделение на

    Иммунология - Петров Р.В. - 1987 год - 416 с. Иммунология - Петров Р.В. - 1987 год - 416 с.
    Учебник освещает общую и частную, в том числе клиническую иммунологию. Рассматриваются история иммунологии, учение об антигенах, антителах, гиперчувствительности замедленного и немедленного типов, Т- и В-системы иммунитета, генетика иммунного ответа,

    Иммунология - Ярилин А.А. - 2010 год - 752 с. Иммунология - Ярилин А.А. - 2010 год - 752 с.
    Описание: В учебнике изложены современные знания о структуре иммунной системы, детально описаны клеточные и молекулярные механизмы, обеспечивающие защиту организма от патогенов, опухолей и чужеродных тканей, изложены основы иммунопатологии и клинической

    Иммунология. Практикум - Ковальчук Л.В., Игнатьева Г.А., Ганковская Л.В. -  ... Иммунология. Практикум - Ковальчук Л.В., Игнатьева Г.А., Ганковская Л.В. - ...
    В пособии представлены современные методы, применяемые в иммунологии и в самых разных областях биологии и медицины. Наряду с классическими методами выделения клеток иммунной системы, изучения их функциональной активности подробно освещены методы

    Иммунология - Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. - 2000 год - 592 с. Иммунология - Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. - 2000 год - 592 с.
    Описание: Авторитетное руководство по иммунологии для студентов медиков и биологов, многократно переиздававшееся в Великобритании. В сравнении с ранее выпущенной книгой того же автора (А. Ройт «Основы иммунологии», М. Мир, 1998) содержит много

    Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии - Л.В.  ... Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии - Л.В. ...
    Иммунология проникает во все области медицины и становится одной из ведущих клинических дисциплин. Современная иммунология осмыслена всем мировым сообществом. Врачи на практике всё чаще имеют дело с больными, у которых скомпрометирована иммунная система.


Добавление комментария

Ваше Имя:
Ваш E-Mail:

Код:
Включите эту картинку для отображения кода безопасности
обновить, если не виден код
Введите код: